Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者令人满意缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次消失肾脏化脓性到消失1HG癌症临床疼痛的实质性率在学龄前时期就有比较好的详细描述，多个肾脏化脓性中会性的学龄前中会有70%在血清转换成后10年末患上癌症，而随访15年的学龄前这一%-减少到84%。比起之下，占临床1HG癌症一半以上的HG1HG癌症的确诊前提还很难获得充分的全面性研究。

越来越多的人开始采用分期管理系统来界定1HG癌症的实质性：群体在消失多种肾脏化脓性时踏入第1期中，消失摄入量异常时踏入第2期中，消失疼痛时踏入第3期中。一些多发肾脏化脓性中会性的群体，在1期和2期，实质性较更慢，并发展为确诊的1HG癌症。我们以前详细描述了一小组在首次扫描到多种肾脏化脓性样本后最少10年无癌症的极更慢实质性者，这小组病患人数少，但相似性非常确实。随后，我们推断出肾脏自身蛋白质抗体CD8+T细胞膜重排在实质性加速的病患中会基本不存在，但在早先确诊和长期存在的癌症病患中会很容易扫描到。这可能表明，与实质性病患比起，这些病患化脓性重排的调节增强。

早期全面性研究表明，尽管调节性T细胞膜(Treg)为数正常，但癌症病患存在一些机能局限性，其中会还包括对IL-2的重排控制能力增大。此外，癌症病患中会的畸变CD4+T细胞膜可能对调节更具抵抗性，显出为畸变T细胞膜的减缓消退，自然环境产生的Treg和体外产生的抑止Treg，以及蛋白质经历的CD4+T细胞膜中会IL-2重排消退。本全面性研究的目地是详细描述了CD4+调节性T细胞膜(Treg)在一小群极加速实质性者中会的相似性，他们的总人数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX全面性研究是一项以人群为基础的纵向全面性研究，在21岁以下确诊的病患亲属中会定期检查1HG癌症的危险因素。我们以前详细描述了长期加速实质性者的相似性，他们保持多重肾脏化脓性中会性超过10年，但很难消失癌症的临床疼痛，更慢性或非受累化脓性。随后，10名一直保持无癌症并愿意提供大量血液样本的加速实质性者纳入T和B细胞膜机能分析。在目前的全面性研究中会，8名更慢实质性者(SP小组)，中会位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的肾脏化脓性中会性。所有的旁观者都东南面1HG癌症实质性的1期，尽管一些人随后失掉了肾脏化脓性对某些蛋白质的中会性重排，然而，一名病患已经东南面2期最少6年，但很难消失临床疼痛，一名病患被诊断为癌症，该受试者72岁，在挖掘实验样本时，其HbA1c升温到53 mmol/mol(7%)，在数据分析中会对该NADP完成了单独审计。分离出来外周血单个核细胞膜(PBMCs)，采用多参数流式细胞膜心法和T细胞膜减缓试验审计NADP中会Treg的频率、遗传基因和机能。采用FlowSOM和CITRUS(聚类确认、总括和回归)完成无委派聚类分析，审计Treg遗传基因。

结果：与有益NADP比起，来自更慢实质性体的失忆CD4+T细胞膜的委派聚类结果显示，启动时的失忆CD4+ Treg频率减少，与组胺抑止的TNFR系统性蛋白(GITR)解读减少有关。一名HbA1c升温的病患与实质性加速者和匹配的对照小组比起，Treg谱有所各有不同。机能分析表明，与有益NADP比起，来自加速实质性体的Treg内皮细胞的CD4+畸变T细胞膜减缓明显受损。显出为对畸变CD4+T细胞膜CD25和CD134解读的减缓减少。

所示1 全面性的遗传基因分析结果显示，CD4+Treg亚HG在更慢实质性队列中会减少。由FlowSOM转换成的Treg室，聚集在来自所有NADP的活CD4+CD45RA -细胞膜上。根据标明物解读确认出10个元簇:失忆T细胞膜_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;失忆T cell_4;CD49b失忆T细胞膜;HLA-DR + GITR +失忆T细胞膜;文件管理系统Treg_1;文件管理系统Treg_2;文件管理系统Treg_3;和文件管理系统Treg_4。(a)采用9个各有不同Treg标明转换成的10个元簇的MST。每个节点代表人一个战略性(100个战略性)，巨大的元战略性(10个元战略性)在节点小组周围上色。每个节点中会的甜品所示透露单个标明的解读级别。(b)每个元聚类的热所示，以结果显示基本标明解读。(c, d)为HD小组(c)和SP小组(d)转换成所示，以及FlowSOM标识的每个元簇的覆盖层。(e-l)非常原三子量为每个metacluster箱直通所示(原三子量> 0.05%)未确定为HD和SP小组:文件管理系统Treg_2 (e),文件管理系统Treg_3 (f),文件管理系统Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +失忆T细胞膜(h)、失忆T cell_1(i),失忆T cell_2 (j),失忆T cell_3 (k) n d CD49b失忆T细胞膜(l)。深粉红色带三子代表人人口为120人SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon一对一符号秩筛选。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 采用CITRUS的估测推测，Treg频率的减少是实质性加速的标志。分级门控(a - f)和棉花分析(g-k)非常SP旁观者和匹配的HD旁观者在CD4+CD45RA−T细胞膜上的不同。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的代表人性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR解读完成分离出来，虚拟FlowSOM群体。(b) HD(黑斑)和SP(蓝点)小组以及NADPSP 606(深粉红色)中会CD25+ cd127的频率概述所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控集合的箱直通所示;(c) HLA-DRloGITR−(文件管理系统Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(文件管理系统Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(文件管理系统Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+文件管理系统T cell)。(g - i)木瓜簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读强度着色，箭头引人注目地簇被标识为SP和HD队列之间的各有不同。(j)箱直通所示结果显示了在SP(蓝点)和HD(灰点)小组中会，CITRUS失忆Treg_3和Treg_4的非常原三子量(%-)。(k)直方所示结果显示每个簇的遗传基因(红色)和Treg标明非常解读与或多或少解读(粉红色);上列，文件管理系统Treg_3;下面即刻，文件管理系统Treg_4。或多或少与所有其他簇中会标明的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon一对一符号秩筛选

所示3 与有益献血者比起，实质性加速者失忆treg的GITR减少。每个失忆CD4+T细胞膜元簇(失忆T细胞膜_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;CD49b +失忆T细胞膜;HLA-DR + GITR +失忆T细胞膜;文件管理系统Treg_2;文件管理系统Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)扫描每个解读标明的改变。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的解读热所示(sp606不还包括在内)。(c,d)失忆Treg_4元簇中会所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(深粉红色)的FlowSOM GITR解读串联，结果显示直方所示(c)和概述所示(d)。Wilcoxon一对一符号秩和筛选，p< 0.07(深粉红色)所有NADP还包括，p< 0.05(粉红色)NADPSP 606和匹配的HD不还包括在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR解读，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(深粉红色)串联，结果显示直方所示(e)和概述所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon一对一符号秩筛选

所示4 来自加速实质性的CD4+ treg细胞膜控制畸变CD4+T细胞膜的控制能力增大。SP小组用粉红色的直通和带三子透露，HD小组用红色的直通和带三子透露，深粉红色的直通/带三子透露NADPsp606。采用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜完成分选。CD4+CD25−(接收者者)被标明为CFSE, Treg按掩蔽的%-校准。用抗CD3 /28微珠还原细胞膜，人才培养3同月完成流式细胞膜心法扫描。(a-d)与CD4+接收者者非常不宜的treg人才培养(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD接收者者人才培养。(a,b,f) CFSE抑止(a,e)和CFSE减缓总和(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的减缓总和。采用中会性对照(启动时的响不宜细胞膜不含treg)计算减缓总和。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重非常测试

所示5 畸变CD4+T细胞膜对加速实质性的T细胞膜还原的减缓更敏感。SP小组用粉红色的直通和带三子透露，HD小组用红色的直通和带三子透露，深粉红色的直通/带三子透露NADPsp606。采用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜完成分选。CD4+CD25−(接收者者)被cfsel标明，treg按掩蔽的%-校准。用抗CD3 /28微珠还原细胞膜，人才培养3同月完成流式细胞膜心法(CD25反染)和细胞膜因三子分析。HD Treg与HD、SP或sp606接收者者共同人才培养。(a,b) CFSE抑止(a)和CFSE减缓总和(b)。(c,d) CD25减缓总和(c)和CD134减缓总和(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才培养中会的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重非常测试

结论：我们得出的结论是，来自加速实质性三子的还原失忆CD4+Treg在GITR解读中会获得了构建和丰沛，合理化了更进一步全面性研究Treg在1HG癌症风险群体中会的异质性的重要性。

原文记事：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28